Protocollo per Colorazione Argentica

Protocollo di Colorazione Argentica o Silver Stain

Il Silver Stain, o colorazione argentica, permette di colorare le proteine separate in un gel di poliacrilammide, un copolimero della acrilammide (CH₂=CH-CO-NH₂), a fronte di separazione tramite elettroforesi. Le proteine si legano agli ioni di Argento, che possono poi essere ridotti al fine di accumularsi in un’immagine visibile stratificata. La tecnica, coinvolta principalmente nella preparazione per analisi tramite spettrometria di massa, è talvolta utilizzata anche per la colorazione di porzioni di DNA. Per la colorazione delle proteine questo protocollo ha livelli di sensibilità maggiori ed un costo minore rispetto al Blue Coomassie ma non fornisce risultati quantitativi.

SOLUZIONI DA PREPARARE

FIXING SOLUTION: 40% etanolo; 10% acido acetico.
WASHING SOLUTION I: 30% etanolo.
WASHING SOLUTION II: 20% etanolo.
SENSITIZER SOLUTION: 0,02% Na2S2O3
SILVER STAIN: 0,2% AgNO3 –fotosensibile– (Aggiungere 0,02% di Formaldeide prima dell’uso).
SOLUZIONE DI SVILUPPO: 3% Na2CO3 (Aggiungere 0,05% di Formaldeide prima dell’uso).
BLOCKING SOLUTION: 0,5% Glicina.