Protocollo di Colorazione membrane con Rosso Ponceau
La colorazione tramite rosso di ponceau è utilizzata per rilevare e colorare le proteine su acetato di cellulosa, PVDF e membrane di nitrocellulosa. Per il PVDF e le membrane in nitrocellulosa, quantità nell’ordine dei microgrammi di proteina si possono evidenziare tramite bande rosse su uno sfondo chiaro. La procedura è reversibile e non invasiva per permettere ulteriori test di carattere immunologico sul campione. Il limite minimo per l’identificazione è di 250 nanogrammi di proteina a fronte di elletroforesi in gel di polyacrylamide. Il colorante è fortemente elettronegativo e si lega ai gruppi amminici della proteina, oltre che alle regioni non covalenti e non polarizzate. Il test non è affidabile su membrane di Nylon
PREPARARE LA SOLUZIONE DI ROSSO DI PONCEAU
10 ml H2O distillata alta purezza (es MiliQ di Millipore)- 0.3 ml glacial acido acetico
- 0.033 g Ponceau S
- QS to 30 ml con MiliQ water
METODICA
- A seguito di elettroforesi, eseguire immersione delle membrane in Soluzione di Rosso Ponceau per circa 10 minuti
- Rimozione ed eventuale filtrazione della soluzione di Rosso Ponceau per un eventuale riutilizzo.
- Lieve decolorazione tramite acqua distillata fino a far emergere chiaramente le bande delle proteine colorate.
- Segnalare le bande standard a lato delle striscie per riferimento
- Decolorazione completa della membrana con successivi lavaggi tramite acqua distillata