Protocollo di precipitazione di proteine in solfato d’ammonio
Il seguente protocollo di laboratorio è per proteine secrete, da modificare opportunamente per altre proteine solubili.
METODICA
Centrifugare il campione cellulare- Trasferire il surnatante in un recipiente o Becher (beaker)
- Prelevare un campione da analizzare su gel
- Aggiungere molto lentamente solfato d’ammonio, in forma di soluzione satura o polvere.
- Agitare per 1 ora.
- Centrifugare le proteine precipitate a 10.000 rpm per 30 minuti.
- Mettere in sospensione nuovamente il pellet in PBS per dialisi a 1/6x o 1/10x in base alla quantità del campione originario.
- Prelevare parte del surnatante dalla proteina centrifugata per ulteiore dialisi.
- % Saturazione Quantità di soluzione satura di solfato d’ammonio da aggiungere per 10ml
- 10 1.11ml
- 20 2.5ml
- 30 4.29ml
- 40 6.67ml
- 50 10ml
- 55 12.22ml
- 60 15ml
- 65 18.57ml
- 70 23.33ml
- 75 30ml
- 80 40ml
- 85 56.66ml
- 90 90ml
- 95 190ml