Protocollo di precipitazione di proteine in solfato d’ammonio

Il seguente protocollo di laboratorio è per proteine secrete, da modificare opportunamente per altre proteine solubili.

 METODICA

  1. protocollo precipitazione proteine solfato ammonioCentrifugare il campione cellulare
  2. Trasferire il surnatante in un recipiente o Becher (beaker) 
  3. Prelevare un campione da analizzare su gel
  4. Aggiungere molto lentamente solfato d’ammonio, in forma di soluzione satura o polvere.
  5. Agitare per 1 ora. 
  6. Centrifugare le proteine precipitate a 10.000 rpm per 30 minuti.
  7. Mettere in sospensione nuovamente il pellet in PBS per dialisi a 1/6x o 1/10x in base alla quantità del campione originario.
  8. Prelevare parte del surnatante dalla proteina centrifugata per ulteiore dialisi.

 

  • % Saturazione     Quantità di soluzione satura di solfato d’ammonio da aggiungere per 10ml
  • 10                       1.11ml
  • 20                       2.5ml
  • 30                       4.29ml
  • 40                       6.67ml
  • 50                       10ml
  • 55                       12.22ml
  • 60                       15ml
  • 65                       18.57ml
  • 70                       23.33ml
  • 75                       30ml
  • 80                       40ml
  • 85                       56.66ml
  • 90                       90ml
  • 95                       190ml