La metodica di preparazione in vitro di piastrine ricoperte di anticorpi (opsonizzate) è un componente tipico degli assay di fagocitosi da parte di monociti.
PROTOCOLLO
Sospendere 1.6×10^8 di piastrine con CMFDA in 200µl di BSGC-BSA (1%) con Anticorpi di controllo. Se gli anticorpi utilizzati sono immunoglobuline di ratto IgG1 (k) contro CD41 di topo (MWReg30 di Becton Dickinson) la concentrazione consigliata è di 0.6µg/ml (0.15µg per 200µl di sospensione). Incubare in seguito la sospensione per 45 minuti, at 37°C.- Centrifugare at 3000 rpm at 4°C per 7 minuti.
- Risospendere in BSGC.
- Centrifugare a 3000 rpm at 4°C per 7 minuti.
- Risospendere in 200µl di IMDM.
- Centrifugare a 3000 rpm a 4°C per 7 minuti.
- Risospendere in 200µl di IMDM-FCS 5% scomplementato.
SOLUZIONI
- BSGC
- BSGC-BSA (99% + 1% )
- IMDM
- IMDM-FCS 5% scomplementato con calore -56°C per 30 minuti.