La  metodica di preparazione in vitro di piastrine ricoperte di anticorpi (opsonizzate) è un componente tipico degli assay di fagocitosi da parte di monociti.

PROTOCOLLO

  1. piastrine al microscopio elettronicoSospendere 1.6×10^8 di piastrine con CMFDA in 200µl di BSGC-BSA (1%) con Anticorpi di controllo. Se gli anticorpi utilizzati sono immunoglobuline di ratto IgG1 (k) contro CD41 di topo (MWReg30 di Becton Dickinson) la concentrazione consigliata è di 0.6µg/ml (0.15µg per 200µl di sospensione). Incubare in seguito la sospensione per 45 minuti, at 37°C.
  2. Centrifugare at 3000 rpm at 4°C per 7 minuti.
  3. Risospendere in BSGC.
  4. Centrifugare a 3000 rpm at 4°C per 7 minuti.
  5. Risospendere in 200µl di IMDM.
  6. Centrifugare a 3000 rpm a 4°C per 7 minuti.
  7. Risospendere in 200µl di IMDM-FCS 5% scomplementato.
SOLUZIONI
  1. BSGC
  2. BSGC-BSA (99% + 1% )
  3. IMDM
  4. IMDM-FCS 5%  scomplementato con calore -56°C per 30 minuti.